微量移液器是一种移取微量液体的新型实验工具,是进行生化实验、微生物学实验和分子生物学实验的必备工具。移液器为量出式量器,分定量移液器和可调移液器两大类。其型式分为单头型和多头型。微量移液器主要包括手动移液器和电子移液器两种。微量移液器的容量规格范围为0.1uL~5mL,满足液体的精确取样和转移的需要。
世界上第一只活塞微升移液器是 Eppendorf公司于1958年发明的,1960年获得该发明的专利权。该公司拥有各种规格的、品牌最齐全的微量移液器。目前,国内外生产的微量移液器品牌众多,并根据不同的使用功能开发出不同用途的产品,例如整支可消毒的移液器、半支可消毒的移液器、电动移液器、PCR专用移液器、大容量移液器和电子连续移液器等、微量移液器的操作使用。
移液器操作及注意事项
(一)设定取液值
移液器为活塞式吸管,以活塞在活塞套内移动的距离确定移液器的容量,利用空气排放的原理进行工作。移液器的容量即移液量,在移液器把柄的显示窗上可清楚显示。
转动移液器的调节旋钮可进行移液量的设定:反时针方向转动旋钮,可提高取液量;顺时针方向转动旋钮,可降低取液量。调整旋钮时不要用力过猛,还应注意移液器显示的数值不应超过其可调范围。
(二)吸液
(1)选择吸头放在移液器套筒上,稍加压力使其与套筒之间无空气间隙。
(2)把按钮压至第一停点【见图2a)】,垂直握持加样器,使吸头浸入液面下3mm~5mm处,然后缓慢平稳地松开按钮,吸入液体[见图2-2b)]。等待1s~2s后从液体中取出。
（三)放液
(1)将吸头口贴到容器内壁底部并保持倾斜,平稳地把按钮压到第一停点[见图2-2e)],等待1s~2s再把按钮压到第二停点以排出剩余液体[见图2-2d)]
(2)压住按钮,同时提起加样器,使吸头贴容器壁擦过[见图2-2d]。松开按钮[见图2-2e)],按吸头弹射器除去吸头。
(四)微量移液器的操作注意事项
(1)勿将微量移液器本体浸入溶液中。
(2)如吸取黏度高的试液,可先将微量移液器头尖端以刀片或剪刀将出口切大,并先行预润后再吸取。
(3)吸取酸液或具腐蚀性溶液后,将微量移液器拆解开,各部位零件以蒸馏水冲洗干净,擦干后再正确组合回复原状。
(4)微量移液器的任何部分切勿用火烧烤,也不可吸取温度高于70℃的溶液,避免蒸气侵入后腐蚀活塞。
(5)套有微量移液器头的微量移液器,无论微量移液器头中是否有溶液,均不可平放,需直立架好。
(6)若不小心使溶液进入吸管柱内时,应尽快予以拆解,将活塞组件、吸管柱、O型圈、铁氟龙垫等各部位以清水冲洗干净后,再以酒精擦拭,擦干后再正确组合回复原状。
微量移液器的性能校验
(一)气密性检测
移液器吸满液体后,手持垂直放置15s,检查吸嘴的尖头有无液滴,如有,则说明漏气。
(二)准确性检测
1.量程小于1uL,建议使用分光光度法检测。将移液器调至目标体积,然后移取染料溶液,加入一定体积的蒸馏水中,测定溶液的稀释度(334nm或340nm),重复几次移液操作,计算移液器的精确度。
2.量程大于1uL,可以用称重法检测。通过对水的称重,转换成体积(体积=质量/密度),鉴別移液器的准确性。由水的密度是随着温度交化而变化,且称量天平本身精确度不符合检测要求,检测又大多在一个开放式空间操作,偏差在所难免。因面,此种称量只能现场粗略地判断移液器的确性进一步的校准必须在专业的实验室操作进行。
注意：称重法实验室必备条件是高度灵做的分析天平(定期校准)、双蒸水和称量容器。水、移液器和吸嘴必须具有相同的温度(20℃时水的密度为0.0982g/cm3)。
(三)专业校准
移液器经过长期使用,弹簧的弹力会发生变形,加之本身又是塑料材质不耐磨擦,因而就会产生误差。为了保证移液器传递液体量的准确性,必须对移液器进行定期校准。为了更好地发挥该类计量仪器的作用,对新购进的仪器要进行校准后才能使用:对正在使用的计量仪器,由于长期使用会造成示值与度量对象的误差,这种误差若不及时校正,必定会影响测试和科研工作,因此,对使用的移液器要定期检定、校正,并建立档案,只有这样才能使移液器在日常工作中更好的发挥作用。
目前,在许多实验室条件下进行的常规检测并不能完全取代专业的校准工作,因为校准对于外部环境、工作条件及使用的精密仪器具有较高的技术要求,而这些条件往往是大多数实验室无法提供的。现在一些大型的移液器制造商均采用全球统一的移液器标准操作规范,通过计算机对分析天平的测量,数据采集、计算、结果评价等环节进行在线控制,即利用专业软件校正控制系统完成。也就是说所有的人为操作都被计算机记录并随报告打印出来,而电脑对数据的评估认证也是在同期进行并完成的,完全排除了人为操纵校准结果的可能性。
（四)微量移液器的标定
合格的移液器在使用一段时间后,由于敲打、磨损或液体吸入吸管柱内等原因均有可能导致其精确度下降,因此需进行标定。移液器1年至少标定1次。蒸馏水称量法标定移液器则是常用的方法。
1.标定条件
室温(20℃士5℃);蒸馏水水温与室温温差不得大于2℃。
2.步骤
(1)将移液器调至拟定校准体积,选择合适的吸头。
(2)根据核查点选择天平,见表2-1。
(3)将称量杯放入天平中,待天平显示稳定后,调零。
(4)来回吸吹蒸馏水3次,使吸头湿润,用纱布拭干吸头。
(5)垂直握住移液器,将吸头浸入液面2mm~3mm处,缓慢地吸取蒸馏水。
(6)将吸头离开液面,去掉外部的液体。以30°放入称量杯中,缓慢地将移液器压到第1挡,等待1s~3s,再压到第2挡,使吸头里的液体完全排出。
(7)记录称量值。
(8)擦干吸头表面。
(9)重复3次移取及称量,取平均值计算移液器的容量允许误差及重复性。
(10)多量程移液器应根据实际量程进行3点核查。
(11)填写和保存校准记录。
3.计算方法
(1)实际容量的计算
移液器在标准温度20℃时的实际容量由式(2-3)计算:
V20=m×Z(t)…………………(2-3)
式中:
V20一标准温度20℃时移液器的实际容量,mL;
m一移液器移取的蒸馏水表观质量,g;
Z--Z因子,由表2-2査得,cm3/g;
t一核查时蒸馏水的温度,℃。
表2-2蒸馏水在不同温度和压强下的Z因子
(2)容量相对误差的计算
式中:
E--容量相对误差,%;
V一标称容量,uL;
3次测量的算术平均值,uL;
计算结果保留2位有效数字。
(3)容量重复性的计算
计算公式见下式：
计算结果保留2位有效数字
4.核查结果判定
不同量程移液器的核査点及其在标准温度20℃时的容量允许误差与重复性应符合JJG646《移液器检定规程》要求。单量程、特殊量程移液器参照相应核查点进行核查。
5.核查结果处理
如果出现任意核查不符合要求的情况,应立刻换人进行第二次核查,如第二次核查仍不符合要求,则停止使用该移液器,并加贴红色停用标签,同时申请外部计量检定。
微量移液器的维护及保养
1.维护
(1)移液器不用时,应在专用支架上竖直放置。
(2)每天使用前,应检查移液器外表面是否有灰尘和污物,要注意移液器的嘴锥处,只能用70%的酒精溶液清洁。
(3)如液体不小心进入活塞室应及时清除污染物。
(4)根据使用频率,所有的移液器应定期用肥皂水清洗,或用60%的异丙醇消毒,再用双蒸水清洗并晾干。
(5)移液器使用完毕后,把移液器量程调至最大值,且将移液器垂直放置在移液器架上。
(6)避免放在温度较高处以防变形致漏液或不准。
(7)使用时要检查是否有漏液现象。
方法是吸取液体后悬空垂直放置几秒,看看液面是否下降。如果漏液,原因大致有以下几方面:
①枪头是否匹配。
②弹簧活塞是否正常。
③如果是易挥发的液体(许多有机溶剂都如此),则可能是饱和蒸汽压的问题,可以先吸放几次液体,然后再移液。
2.保养
经常使用的移液器,每半年应保养一次。从移液器的拆卸开始,步骤如下:
(1)按下管嘴推顶杆,将配置工具的尖端插入推顶杆底部的槽孔中,拔出管嘴推杆轴套和管嘴推顶杆。
(2)用配置专用工具反时针方向转动嘴锥并拆下,拔出柱塞杆。
(3)从嘴锥杆上拆下O型圈。注意5uL~50uL的移液器有两个O型圈,可利用柱塞杆的细端拆下它们。
(4)用一块干燥无绒布清洁柱塞杆、柱塞弹簧和O型圈,检查柱塞体是否有灰尘颗粒。
(5)擦净零件并涂上高真空活栓脂膏,将各零件重新组装成移液器。
(6)重新检定。
